Fiskfrö är den viktigaste komponenten för fiskodling. Sötvattenresurserna i vårt land för fiskodling uppskattas till 2,85 miljoner hektar dammar och tankar. Dessutom, ytterligare 2,05 miljoner hektar vattenyta finns tillgängligt i form av reservoarer eller sjöar. Det har uppskattats att nästan 14 250 miljoner yngel skulle behövas för att utsättas även för nuvarande 2,85 miljoner hektar med en konservativ besättningsgrad på 5 000 yngel/ha. Den nuvarande produktionen är 15007 miljoner yngel. Bortsett från detta, minst en extra kvantitet på 4100 miljoner yngel krävs för att utsätta den tillgängliga arean av sjöar och reservoarer med en genomsnittlig utsättningsgrad på 2000 yngel/ha. Detta indikerar att det finns ett behov av att föda upp yngeln för att lagra de tillgängliga vattenresurserna.
Fiskfröet kommer från tre källor – flod, kläckerier och buntar. Insamling av frö från flodkällan var en uråldrig praxis. Denna metod är ansträngande och vi får blandningen av önskat och oönskat fiskfrö. Kläckerier är det bästa sättet att få fiskfrö. Förutom dessa, buntuppfödningen är också en bra metod att samla in fiskfröet genom att skapa en naturlig livsmiljö.
De olika flodsystemen i Indien uppvisar variationer med avseende på fördelningen och överflöd av deras fiskfauna. Detta beror främst på deras individuella ekologiska förhållanden, såsom gradient, terräng, flöde, djup, temperatur, substrat, etc. De norra floderna är fleråriga och stödjer ett rikt kommersiellt fiske. Förutom deltaområdena, fisket av halvöns floder är dåligt både i de övre och mellersta delarna.
1 jag n du c e d B r eed i n g T e c h Nej l o g y
Karpar häckar i strömmande vatten som floder. Naturligtvis häckar de aldrig i begränsat vatten. Fröet som samlas in från naturresurser är i allmänhet ett blandat bestånd med både önskvärda och oönskade sorter. Separering av önskvärt utsäde från blandat bestånd är ett stort problem. På grund av hanteringen, de önskvärda sorterna kan dö. Om något frö från rovfisk hittas, de skadar önskvärt fiskfrö. Ett annat stort problem är att aldrig få önskat antal i naturlig samling. Tillgängligheten av rent frö är mycket svårt. För att övervinna alla dessa problem är inducerad avel en utmärkt teknik för att få rent och erforderligt fiskfrö. Det har flera fördelar. Med inducerad förädling kan rent frö av önskvärda arter erhållas. Anta att rohu-frö är nödvändigt, endast rohu-frö kan produceras på ett par dagar. Erforderligt antal frön kan produceras med denna teknik. Anta att en fiskodling behöver 1 crore fiskfrö, detta nummer kan produceras mycket enkelt på kortare tid. Problemen med identifiering och segregering av utsäde uppstår inte. Denna teknik är mycket enkel. Friskt frö kan produceras. Fisk kan leka mer än en gång på ett år. Hybridisering är möjlig.
I inducerade avelstekniker, fyra huvudtyper av material används för att ge injektioner till fisk – hypofysextraktioner, HCG, ovaprim och ovatid.
Ind u ce d Breedin g kvickhet h Pi t uitar y Glan d Extr a ctio n
Fiskuppfödning genom hypofysextraktion är ett effektivt och pålitligt sätt att få rent frö från odlingsbara fiskar och praktiseras idag i ganska omfattande skala i Indien såväl som många andra länder i världen. Det går ut på att injicera mogna hon- och hanfiskar med extrakt av hypofysen tagna från andra mogna fiskar.
H istori c a l Tillbaka g runda:
Dagens koncept för hypofysens roll i reproduktionen av ryggradsdjur rapporteras ha sitt ursprung från experimenten från Aschheim och Zondek 1927 när de fann att hypofysimplantat påskyndade den sexuella utvecklingen av honmöss. Tre år senare, år 1930, Houssay från Argentina utförde det första sådana experimentet på en fisk. Han injicerade en liten viviparös havskatt, Cresterodon decammaculatus med extrakt av hypofysen framställda från en annan fisk, Prochilodus platensis orsakar för tidig födsel av utvecklande ungar. 1934, En framgångsrik teknik kunde utarbetas av Von Ihring i att vissa brasilianska dammfiskar fick leka genom att injicera dem med en suspension av färska hypofyser som samlats in från andra mindre värdefulla fiskarter. Brasilianarna, Således, var de första att använda tekniken för fiskuppfödning framgångsrikt genom hypofysering. 1937, Den ryske forskaren Gerbiskii lyckades framkalla ett betydande antal störar, Acipenser stellatus.
Indien är det tredje landet i världen som gör tekniken till en integrerad del av sitt fiskodlingsprogram. Det första försöket till hypofysering i Indien gjordes av Hamid Khan 1937 när han försökte framkalla lek i Cirrhinus mrigala genom injektion av däggdjurshypofysen. Nästa försök gjordes av Hussain 1945 med vissa hormoner som 80-120 RV Prolan och Antuitrin-S till kvinnliga Labeo rohita och Cirrhinus mrigala. 1955, Hiralal Choudhuri lyckades framkalla lek i Esomus danricus genom intraperitonal injektion av hypofysextrakt av Catla catla. Han lyckades också med aveln av Pseudotropius atherinoides. Ramaswamy och Sunderaraj lyckades avla i Heteropneustes fossilis och Clarias batrachus 1955 respektive 1956. Den första framgången i inducerad uppfödning av indiska större karpar genom hypofysering uppnåddes 1957 av Hiralal Chaudhuri och Alikunhi vid CIFRI, Cuttack.
Fis h P i tuit a r y Gla n d :
Fiskhypofysen är en liten, mjuk kropp och krämvit till färgen. Den är mer eller mindre rund hos karpar. Den ligger på den ventrala sidan av hjärnan (Fig. 3.1) bakom den optiska chiasma i en konkavitet av golvet i hjärnboxen, känd som Sella turcica och omsluten av ett tunt membran som kallas duramater. Hos få fiskar är den fäst vid hjärnan med en tunn stjälk, känd som den infundibulära stjälken. Baserat på den infundibulära stjälken, körtlarna delas in i två typer, nämligen, platybasic – utan stjälk, har en öppen infundibulär fördjupning och leptobasic – med stjälk, har utplånat infundibulär fördjupning. Leptobasic typ av hypofys finns i karp och platybasic typ finns i channidae och nandidae. Körtelns storlek och vikt varierar beroende på fiskens storlek och vikt. I Labeo rohita, den genomsnittliga vikten av hypofysen är 6,6 mg i 1-2 kg fisk, 10,3 mg i 2-3 kg fisk, 15,2 mg i 3-4 kg fisk och 18,6 mg i 4-5 kg fisk.
Hypofysen utsöndrar de gonadotropa hormonerna, FSH eller follikulärt stimulerande hormon, och LH eller luteiniserande hormon. Båda hormonerna utsöndras under hela året, men proportionen i vilken de utsöndras är direkt korrelerad med cykeln av gonadmognad. FSH orsakar tillväxt och mognad av äggstocksfolliklar hos kvinnor och spermatogenes i testiklarna hos män. LH hjälper till att omvandla äggstocksfolliklarna till corpus lutea hos kvinnor och främja produktionen av testosteron hos män. Dessa hormoner är inte artspecifika, dvs. ett hormon som erhålls från en art kan stimulera en annan fisks könskörtlar. Dock, det finns stor variation i dess effektivitet hos olika arter. Experiment utförda på inducerad uppfödning av fiskar har tydligt visat den relativa effektiviteten av fiskhypofysextrakt jämfört med däggdjurshypofyshormoner, könshormoner och olika steroider. Detta är anledningen till att fiskhypofys används i stor utsträckning idag i fiskuppfödningsarbete över hela världen.
Collecti o n o f Hypofys y Körtel :
Fisken som donerar hypofysen, dvs. fisken från vilken hypofysen samlas in kallas donatorfisken. Framgången med inducerad uppfödning av fisk beror till stor del på det korrekta urvalet av donatorfisken. Körteln ska helst samlas in från fullt mogna dräktiga fiskar, eftersom körteln är mest potent vid häckningstillfället eller strax före leken. Styrkan i körteln minskar efter lek. Körtlar som samlats in från omogna eller förbrukade fiskar ger vanligtvis inte tillfredsställande resultat. Körtlar i inducerade uppfödda fiskar som samlats in omedelbart efter lek har också visat sig vara effektiva och kan användas för uppfödning av andra fiskar. Den lämpligaste tiden i Indien för insamling av hypofyskörtlar på stora karpar är under maj till juli månader, eftersom majoriteten av karparna uppnår avancerade stadier av sin mognad under denna period. Sedan vanlig karp, Cyprinus carpio är en perenn uppfödare, dess mogna individer kan erhållas nästan året runt för insamling av körtlar. Körtlarna är vanligtvis att föredra att samlas in från nydödade fiskar, men de som samlas in från iskonserverade exemplar används också.
Flera tekniker används för insamling av hypofyser i olika länder. I Indien, den allmänt använda tekniken för körtelinsamling är att skära av hårbotten på fiskens skalle med ett snett slag med en slaktkniv. Efter att hårbotten har tagits bort, den grå substansen och fettämnena som ligger över hjärnan rengörs försiktigt med en bit bomull. Den sålunda blottade hjärnan lyfts försiktigt ut genom att den lossas från nerverna. I majoriteten av cypriniderna, när hjärnan lyfts, körteln lämnas kvar på golvet i hjärnboxen. Duramaten som täcker körteln avlägsnas sedan försiktigt med en fin nål och pincett. Den exponerade körteln plockas sedan upp intakt utan att orsaka någon skada på den eftersom skadade och trasiga körtlar resulterar i förlust av styrka.
Körtlar samlas också in genom foramen magnum. Det är, faktiskt, en mycket enklare metod för borttagning av körtlar som vanligen praktiseras av proffs för massuppsamling på trånga och bullriga fiskmarknader. I denna metod för körtelinsamling, det krävs att fisken i huvudsak halshuggas. På marknader, körtlar samlas in från fiskhuvuden som redan skärs av återförsäljare. I de avskurna fiskhuvudena, Foramen kan tydligt ses bakifrån som innehåller grå substans och fettämnen. Hjärnan ligger på de ventrala sidorna av foramen. För att ta ut körteln, den grå substansen och fettämnena avlägsnas först genom att föra in den trubbiga änden av pincett i foramen och dra ut hela substansen utan att störa hjärnan. Hjärnan lyfts försiktigt upp och skjuts framåt eller dras ut ur hålet. Körteln som ligger vid golvet i hjärnboxen plockas sedan upp med en fin pincett. En experimentell arbetare lyckas enkelt samla in cirka 50-60 körtlar på en timme genom att använda denna insamlingsteknik.
P reservation o f Pituit a r y Körtel s :
Om de uppsamlade körtlarna inte är avsedda att användas då och där, de måste bevaras. På grund av deras glyko- eller slemproteinnatur, de är benägna för omedelbar enzymatisk verkan. Hypofysen kan konserveras med tre metoder – absolut alkohol, aceton och frysning. Konservering av fiskhypofysen i absolut alkohol föredras i Indien. Dessutom, experiment som hittills gjorts med alkoholkonserverade körtlar på indiska storkarpar har gett mer positiva resultat än med acetonkonserverade körtlar.
Körtlarna efter insamling läggs omedelbart i absolut alkohol för avfettning och uttorkning. Varje körtel förvaras i en separat behållare seriemärkt för att underlätta identifieringen. Efter 24 timmar, körtlarna tvättas med absolut alkohol och förvaras igen i färsk absolut alkohol i mörkfärgade flaskor och förvaras antingen i rumstemperatur eller i kylskåp. Enstaka byte av alkohol hjälper till att hålla körtlarna i gott skick under längre perioder. För att förhindra att fukt kommer in i flaskorna, de kan förvaras inuti en exsickator som innehåller lite vattenfri kalciumklorid. Det är att föredra att förvara körtlarna i kylskåp. De kan förvaras i kylskåp upp till 2-3 år och i rumstemperatur upp till ett år.
Aceton är också ett bra konserveringsmedel. I denna metod, strax efter insamling, körtlarna förvaras i färsk aceton eller i torr iskyld aceton i ett kylskåp vid 100 C i 36-48 timmar. Under denna period, acetonet byts ut 2-3 gånger med ca 8-12 timmars intervall för korrekt avfettning och uttorkning. Körtlarna tas sedan ur aceton, lägg på ett filterpapper och låt torka i rumstemperatur i en timme. De förvaras sedan i kylskåp vid 100 C, företrädesvis i en exsickator laddad med kalciumklorid eller något annat torkmedel. Bevarandet av körtlar i aceton praktiseras till stor del i USSR och USA.
P gottgörelse o f Pituita r y Gl a n d E extrahera :
Konserverade körtlar vägs sedan. Detta är väsentligt för att exakt bestämma den dos som ska ges i enlighet med uppfödarnas vikt. Vikten av körteln kan tas individuellt eller i grupp. För att få en mer exakt vikt, en körtel ska vägas exakt efter två minuter efter att den tagits bort från alkohol.
Hypofysextraktet ska beredas strax före injektionstillfället. Mängden körtel som krävs för injektion beräknas först utifrån vikten för uppfödaren som ska injiceras. Därefter väljs körtlarna och den nödvändiga mängden körtlar tas ut ur flaskorna. Alkoholen får avdunsta, om körtlarna är alkoholkonserverade. Acetontorkade körtlar tas direkt från flaskorna för maceration.
Körtlarna macereras sedan i en vävnadshomogenisator genom att tillsätta en uppmätt mängd destillerat vatten eller vanlig saltlösning eller någon fysiologisk lösning som är isotonisk med blodet från mottagarfisken. De mest framgångsrika resultaten av inducerad avel i de indiska stora karparna har hittills erhållits med destillerat vatten och 0,3 % vanlig saltlösning. Koncentrationen av extraktet hålls vanligtvis inom intervallet 1-4 mg körtel per 0,1 ml av mediet, dvs. med en hastighet av 20-30 gm. av körteln i 1,0 ml av mediet. Efter homogenisering, suspensionen överförs till ett centrifugrör. Vid överföring, homogenatet ska skakas väl så att sedimenterade körtelpartiklar som blandas med lösningen kommer in i centrifugröret. Extraktet i röret centrifugeras och supernatanten sugs upp i en injektionsspruta.
Hypofysextraktet kan också beredas i bulk och konserveras i glycerin (1 del extrakt:2 delar glycerin) före fiskens uppfödningssäsong så att besväret med att bereda extrakt varje gång före injektion undviks. Buljongextraktet ska alltid förvaras i kylskåp eller på is.
T e c h niq u e o f B ree d ing :
Den inducerade avelsverksamheten av stora karpar tas upp när regelbunden monsun sätter in, fiskarna blir helt mogna och vattentemperaturen sjunker. Kvinnor har en runda, mjuk och utbuktande buk med svullna rödaktiga ventiler och hanar med fritt sipprande milta väljs ut för avel. En manlig uppfödare kan också lätt särskiljas genom grovhet på ryggytan av dess bröstfenor.
1 . Do s ag e o f pitui t ar y extr a c t :
Den viktigaste aspekten av inducerad uppfödning av fisk är bedömningen av korrekta doser av hypofysextrakt. Styrkan av körteln varierar beroende på storleken och stadierna av sexuell utveckling hos donatorn, såväl som arten av donatorfisken, tidpunkt för insamling av körtlar och deras korrekta bevarande. Hypofysens dos beräknas i förhållande till vikten hos de uppfödare som ska injiceras. Det har också noterats att identiska doser till uppfödare med liknande vikt kan ge motsägelsefulla resultat på grund av skillnader i mognad hos gonader. Även tunga doser av hormoner kanske inte är effektiva om gonaderna är i resorptionsstadiet. Genom noggrant urval av uppfödare och administrering av en känd vikt av hypofysextrakt per kg kroppsvikt hos uppfödare, framgångsrik avel kan erhållas.
Experiment med standardisering av doser indikerar att administrering av en preliminär låg dos till den kvinnliga uppfödaren följt av en högre effektiv dos efter 6 timmar visar sig vara mer framgångsrik än en enkel knockoutdos. En enda hög dos har visat sig vara användbar när uppfödarna är i perfekt kondition och vädret är gynnsamt. Rohu svarar bra på två injektioner medan catla och mrigal på både en och två injektioner.
En initial dos med en hastighet av 2-3 mg. av hypofysen per kg kroppsvikt av fisk administreras endast till den kvinnliga uppfödaren. Manliga uppfödare behöver ingen initial dos, om de sipprar milt vid lätt tryck på buken. Två hanar mot varje hona gör ett avelsset. För att göra ett bra matchande set, vikten av hanarna tillsammans bör vara lika med eller mer än honan. Om tillståndet för någon av de två hanarna inte återfinns i det fritt sippande stadiet, en initial injektion kan administreras till mannen med en hastighet av 2-3 mg/kg kroppsvikt. Efter 6 timmar, en andra dos på 5-8 mg/kg kroppsvikt ges till honan, medan båda hanarna får den första eller andra dosen i en hastighet av 2-3 mg/kg kroppsvikt. Små förändringar i doser kan göras beroende på uppfödarnas mognadstillstånd och rådande miljöfaktorer. I avsaknad av en kemisk balans, 1-3 hypofyser är effektiva för ett par fiskar.
2 . M e tho d o f injektion :
Intrakraniella injektioner föredras i Sovjetunionen och intraperitoneala i USA och Japan. Intramuskulär injektion är den vanligaste metoden i Indien. Den intramuskulära injektionen är mindre riskabel jämfört med de andra metoderna. Intraperitoniala injektioner ges vanligtvis genom de mjuka områdena av kroppen, vanligtvis vid basen av bäckenfenan eller ibland vid basen av bröstfenan. Men det finns en viss risk att skada de inre organen, speciellt de utspända gonaderna vid administrering av en intraperitoniell injektion i fullt mogna fiskar.
Injektioner ges vanligtvis vid svansröret eller axelregionerna nära basen av ryggfenan. När man ger injektioner till karparna, nålen sticks in under en våg som håller den parallell med fiskens kropp först och sticks sedan in i muskeln i en vinkel. Det finns ingen hård och snabb regel angående tidpunkten för injektionen. Injektioner kan ges när som helst på dagen och natten. Men eftersom låg temperatur är till hjälp och natten förblir förhållandevis tystare, injektionerna ges vanligtvis sent på eftermiddagen eller kvällen med tidpunkter
Utsäde Produktion T eknologier 33
så anpassad att fisken kan använda nattens lugn för ostörd lek.
Den mest bekväma injektionssprutan som används för ändamålet är en 2 cc spruta med graderingar på 0,1 cc division. Storleken på nålen för sprutan beror på storleken på de uppfödare som ska injiceras. Nål nr 22 används lämpligen för 1-3 kg karpar, Nr 19 för större karpar och nr 24 kan användas för mindre karpar.
Användning av bedövningsmedel under injektion skulle avsevärt öka överlevnaden för yngelfiskar. Vanliga anestetika är MS 222 och Quinaldine. MS 222 kan tillsättas vatten i doser på 50-100 mg/liter. En rulle bomull indränkt i 0,04 M av denna lösning kan föras in i munnen på fisken. Kinaldin används i en mängd av 50-100 mg/liter.
3 . B reedin g h ap a ett d spa w ning :
Efter injektionen, uppfödarna släpps omedelbart inne i avelshapan. En avelshapa är i allmänhet gjord av fint tyg i storleken 3,5 x 1,5 x 1,0 m för större uppfödare och 2,5 x 1,2 x 1,0 m för uppfödare som väger mindre än 3 kg. Alla sidor av avelshapa är sydda och stängda förutom en del på toppen för att introducera uppfödarna inuti. Rent generellt, en uppsättning uppfödare släpps i varje avelshapa, men ibland, för att spara på hypofysmaterial, Samhällsuppfödning prövas också genom att minska antalet manliga uppfödare. Efter att fisken släppts, öppningen på hapa är säkert stängd så att uppfödare inte kan hoppa ut och fly. Istället för hapas, cementcisterner eller plastpooler stora som hapas kan också användas för avel.
Leken sker normalt inom 3-6 timmar efter den andra injektionen. Strax efter befruktningen, äggen sväller upp avsevärt på grund av vattenabsorption. Befruktade ägg från stora karpar ser ut som glänsande glaspärlor av kristallklar transparens medan de obefruktade ser ogenomskinliga och vitaktiga ut. Storleken på ägg från samma art av olika uppfödare varierar avsevärt. Fullt svullna ägg från de indiska stora karparna mäter 2,5 mm i diameter, den största är den av catla och den minsta av rohu. Karpäggen är icke-flytande och icke-vidhäftande typ. Gulan har ingen oljekula. De indiska stora karparna har en riklig äggläggningskapacitet. Deras fruktsamhet, i genomsnitt, är 3,1 lakh i rohu, 1-3 lakh i catla och 1,5 lakh i mrigal.
De utvecklande äggen hålls kvar i häckningshapan ostört under en period av minst 4-5 timmar efter leken för att äggen ska kunna bli ordentligt vattenhärdade. Efter det här, äggen samlas upp från hapa med hjälp av en mugg och överförs till en hink med en liten mängd vatten. Uppfödarna tas sedan ut och vägs för att ta reda på skillnaden före och efter leken. Detta ger en uppfattning om mängden ägg som läggs. Den totala volymen och antalet ägg kan enkelt beräknas från den kända volymen och antalet ägg i provmuggen. Andel befruktade ägg bedöms också i enlighet med detta genom att göra stickprov före och efter leken. Detta ger en uppfattning om mängden ägg som läggs. Den totala volymen och antalet ägg kan enkelt beräknas från den kända volymen och antalet ägg i provmuggen. Andel befruktade ägg bedöms också i enlighet med detta genom att göra stickprov.
4 . S tri sid stift g :
Kinesiska karpar leker dock inte naturligt och när de leker, procenten befruktning är i allmänhet mycket låg. Strippning (Fig. 3.1) eller konstgjord insemination följs därför. Fiskhonan hålls med huvudet lutande uppåt och svansen nedåt och buken vänd mot fartyget, och äggen samlas in i ett emalj- eller plasttråg genom att trycka på honans kropp. Hanfisken hålls sedan på liknande sätt och mjölken pressas ut i samma tråg. Könscellerna blandas sedan så snart som möjligt med hjälp av en fjäderpenna för att möjliggöra befruktning. De befruktade äggen tvättas sedan några gånger med rent vatten för att avlägsna överflödig mjölk och får stå ostört i sötvatten i cirka 30 minuter. Äggen är sedan redo att släppas ut i kläckningstankarna.
T e chn i qu e o f h a tch i n g t h e e ggs :
Äggen som samlas in från häckningshapas överförs till kläckningshapas. En kläckningshapa består av två separata bitar av hapas, den yttre hapa och den inre hapa. Den inre hapan är mindre i storlek och monteras inuti den yttre hapan. Den yttre hapan är gjord av ett tunt tyg i standardstorleken 2 x 1 x 1 m medan den inre hapan är gjord av rundmaskigt myggnätstyg i måtten 1,75 x 0,75 x 0,5 m. Alla hörn av den yttre och inre hapas är försedda med öglor och rep för att underlätta installationen. Cirka 75, 000 till 1, 00, 000 ägg är jämnt fördelade inuti varje inre hapa. Äggen kläcks på 14-20 timmar vid ett temperaturområde på 24-310 C. Inkubationsperioden, faktiskt, är omvänt proportionell mot temperaturen. Efter kläckning, ungarna flyr in i den yttre hapan genom maskorna i den inre hapan. Den inre hapan som innehåller äggskalen och de döda äggen som tas bort när kläckningen är klar. Ungarna förblir i yttre hapa ostört till tredje dagen efter kläckningen. Under denna period, de livnär sig på maten som lagras i sin gulesäck. På den tredje dagen bildas munnen och kläckningarna börjar rikta rörelser och matning. I detta skede samlas de försiktigt in från den yttre kläckningshapan och lagras i förberedda plantskolor.
Det har visat sig att indiska stora karpar kan fås att leka två gånger under samma säsong med ett intervall på två månader. Uppfödarna efter den första leken utfodras med jordnötsoljekaka och riskli i förhållandet 1:1 vid 2,5 procent av kroppsvikten. När gynnsamma klimatförhållanden uppstår, de mognar och är redo för lek.
I d uce d Br e edin g w i t h H.C. G .
Idag är hypofysextraktion en väletablerad teknik för inducerad avel över hela världen. Dess storskaliga användning ställer till följande problem med avseende på tillgänglighet och kvalitet på hypofysen (P.G). Otillräckligt utbud av P.G., hög kostnad, variation i hypofysgonadotropinstyrka och fusk av skrupelfria P.G. leverantörer. För att övervinna dessa problem, Humant koriongonadotropin (H.C.G) har hittats som ett alternativ för hypofysen. H.C.G. upptäcktes i början av 1927 av Aschheim och Zondek. De extraherade hormon av god kvalitet med luteiniserande gonadotrofisk aktivitet från urinen hos gravida kvinnor. Ryska arbetare använde första gången koriongonadotropin 1964 med ett handelsnamn som Choriogohin och fick bra resultat på Loach. Bratanor (1963) och Gerbilski (1965) använde H.C.G på karpar och öringar och nådde stora framgångar. Tang (1968) uppgav att när kinesiska karpar behandlades med fiskhypofys i kombination med C.G., effektiviteten på inducerad avel ökade. En genomgång av litteraturen tyder på att H.C.G. är effektivt antingen ensamt eller i kombination med P.G. extrakt för att framkalla olika fiskar över hela världen.
H.C.G. är ett glykoprotein eller sialoprotein, på grund av kolhydratmolekylerna fästa vid proteinmolekylerna. Dess primära funktion är att upprätthålla produktionen av östrogen och progesteron i corpus luteum. Det produceras av moderkakan och utsöndras genom urinen under de tidiga stadierna av graviditeten (2-4 månader). H.C.G består av 2 underenheter a och b och har en molekylstorlek på 45, 000-50, 000 dalton. Det finns 17 aminosyror i den, varav alanin, prolin, serin, cystin och histidin är viktiga. På grund av det stora antalet aminosyror, H.C.G. har en hög proteinhalt. Molekylvikten har rapporterats som 59, 000 genom gelfiltrering och 47, 000 genom sedimentationsjämvikt.
Under de tidiga stadierna av graviditeten H.C.G. är rik på urin från gravida kvinnor. Flera metoder används för extraktion av H.C.G. Aschheim och Zondek (1927) använde etanol för utfällning. Katzman och Caina använde olika absorbenter. Kommersiell rå H.C.G-extraktion görs med gelfiltrering.
Follikelstimulerande hormon (FSH) och luteiniserande hormon (LH) i hypofysen spelar en viktig roll i fiskens normala reproduktion, dvs. för att främja utvecklingen av könskörtlar, tillväxt, mognad och lek. H.C.G liknar mer eller mindre till karaktär och funktion F.S.H och L.H. Eftersom hypofysen används för inducerad fiskuppfödning, H.C.G kan även användas för tidig mognad av gonader. Överlägsenhet av H.C.G över P.G kan mätas på följande grunder. Fisk når mognad snabbare med H.C.G., häckningssäsongens lek kan ökas med H.C.G., H.C.G. säkerställer bättre överlevnad av spawn, det minskar tidsskillnaden mellan förberedande och slutliga doser, H.C.G är mer ekonomiskt och har lång hållbarhet, H.C.G är lätt tillgänglig från en standardkälla, är därför mer pålitlig, periodiska injektioner av H.C.G under hela året säkerställer bättre hälsa och ökad vikt och gonadutveckling. H.C.G:s styrka är känd (30 IE/mg), tillgänglig i snygga paket med kända vikter, inget konservering är inblandat, kan inte vara falsk, H.C.G-behandlade fiskar kan användas mer än en gång för inducerad avel under samma säsong, dödligheten för ungar är försumbar, konsumtionen av läkemedlet är mindre under inducerad avel, H.C.G kan användas som tillväxthormon och absorptionen av ägg i slutet av häckningssäsongen är jämförelsevis mindre vid administrering av H.C.G.
Den råa H.C.G är i pulverform och gråvit eller ljusgul till färgen. Det löser sig lätt i vatten. Den beräknade mängden rå H.C.G tas in i en vävnadshomogenisator och rörs om i 5-10 minuter med uppmätt destillerat vatten. Den centrifugeras i 3-5 minuter. Den klara ljusgulaktiga supernatantvätskan med H.C.G-hormonerna tas och injiceras omedelbart. Varje fördröjning av användningen kommer att leda till att styrkan försvinner.
Vid silverkarp (Hypophthalmichthyes molitrix), användningen av H.C.G har visat sig vara ganska framgångsrik. Doseringen är 4-6 mg/kg. kroppsvikt hos en man, och 6-8 mg/kg kroppsvikt av första dosen och efter cirka 6-7 timmar, 10-12 mg/kg kroppsvikt av andra dosen för hona vilket gav bra resultat. Användning av endast H.C.G vid uppfödning av indiska storkarpar har hittills inte gett framgångsrika resultat. En kombination av 60-80% H.C.G och 40-20% P.G för indiska stora karpar och gräskarpar (Ctenopharyngodon idella) är framgångsrik. Fiskar som förmås att häcka med enbart H.C.G är multar, Cyprinus carpio, Lctalurus punctatus, Oreochromis nilotica, Aristichthys nobilis, Misgurnus fossilis, Esox lucius och Epinephelus tauvina.
Senare arbete visar att kombinationen av H.C.G och P.G. är mer att rekommendera än enbart H.C.G eller P.G. Mer arbete behöver göras för att standardisera doseringen av H.C.G för inducerad uppfödning av stora karpar och kinesiska karpar.
I d uce d Bree d i g w den h O vapr i m
På grund av problemet med varierande styrka hos hypofysen, alternativ prövades. Försök har gjorts i olika länder att använda analoger av luteiniserande hormoner – frisättande hormoner (LH-RH) för inducerad uppfödning av fiskar med varierande framgång. Dock, framgången med LH-RH var inte alltid konsekvent, förutom dess högre dosbehov för induktion av lek. Denna epokgörande undersökning banade väg för att utveckla enkel och effektiv teknik för inducerad uppfödning av de flesta av de odlingsbara fiskarna. I ett gemensamt samarbetsprojekt, finansierat av International Development Research Centre, Kanada till Dr Lin från Kina och Dr Peter från Kanada, en rad undersökningar genomfördes för att utveckla en tillförlitlig teknik för uppfödning av fiskar. Deras undersökningar ledde till utvecklingen av en ny teknik som kallas "LNPE"-metoden, varvid en analog av LH-RH kombineras med en dopaminantagonist. Baserat på principen, M/s Syndel Laboratories Limited, Kanada har tillverkat ett nytt läkemedel som kallas ovaprim.
Ovaprim är en färdig att använda produkt och lösningen är stabil vid rumstemperatur. Den innehåller en analog av 20 µg laxgonadotropinfrisättande hormon (sGnPHa) och en dopaminantagonist, domperidon vid 10 mg/ml. Styrkan hos ovaprim är enhetlig och innehåller sGnRHa som är känt för att vara 17 gånger mer potent än LH-RH (Peter, 1987). Dopaminantagonisten, domperidon som används i ovaprim rapporteras också vara bättre än en annan vanlig antogonist, pimozid. Ovaprim är en färdig att använda produkt och en som inte kräver kylförvaring, verkar vara det mest bekväma och effektiva ägglossningsmedlet.
Detta läkemedel administreras till både kvinnliga och manliga stamfiskar samtidigt i en enda dos, till skillnad från hypofysextrakt som ges i två delade doser. Detta minskar inte bara hanteringen av yngelfiskar utan hjälper också till att spara avsevärd tid och arbete vilket kommer att öka kostnaderna för utsädesproduktion. Lekesvaret hos behandlade arter har visat sig vara överlägset de arter som injicerats med hypofysextrakt.
The efficiency of ovaprim for induced breeding of carps have given highly encouraging results in catla, rohu, mrigal, silver carp, grass carp, big head, etc. The effective dose required for various species of carps is found to vary considerably. The common dose for all carps is 0.10-0.20 ml ovaprim/kg body weight of males and 0.25-0.80 ml ovaprim/kg body weight of females. Female catla is found to respond positively for a dose range of between 0.4-0.5 ml/kg, while rohu and mrigal respond to lower doses of 0.35 ml/kg and 0.25 ml/kg respectively. Among exotic carps, silver carp and grass carp are bred at doses ranging between 0.40-0.60 ml/kg. Big head carp bred successfully at 0.50 ml/ kg. For males of Indian carps, 0.10-0.15 ml/kg and for exotic male carps 0.15-0.20 ml/kg of dosages are found to be optimum. The method of injection is the same as pituitary.
In many countries including our country, ovaprim is used on a large scale for induced breeding of all cultivable fishes successfully. I Indien, initial trials were conducted during 1988 in Karnataka, Andhra Pradesh and Tamil Nadu.
Ovaprim has unique advantages over pituitary hormone – ready to use liquid form in 10 ml vial, consistent potency and reliable results, long shelf life, and can be stored at room temperature, formulated to prevent over dosing, male and female can be injected only once simultaneously, reduces handling and post breeding mortality, repeated spawning possible later in the season and high percentage of eggs, fertilization and hatching.
I d uce d br e edin g w i t h o vati d e
Ovatide is an indigenous, cost-effective and new hormonal formulation for induced breeding of fishes. The new formulation is having the base of a synthetic peptide which is structurally related to the naturally occuring hormone, goanadotropin releasing hormone (GnRH). GnRH is not a steroidal hormone and belongs to the class of organic substances called peptides. It is presented as a low viscosity injectable solution which is not only highly active but also cost-effective compared to other commercially available spawning agents. It is also effective in breeding major carps and catfishes. The doses for females are 0.20-0.40 ml/kg for rohu and mrigal, 0.40-0.50 ml/kg for catla, silver carp and grass carp and 0.20-0.30 ml/kg for calbasu. The dosages for males are 0.10-0.20 ml/kg for rohu, mrigal and calbasu, 0.20-0.30 ml/ kg for catla and 0.20-0.25 ml/kg for silver carp and grass carp.
The advantages of ovatide are:It is cost-effective hormonal preparation, it gives high fertilisation and hatching percentage (85-95%), it is increases egg production through complete spawning, it produces healthy seed, it is easy to inject due to its low viscosity, it does not cause adverse effects on brood fish after injection, it can be administered in a single dose to brooders, it can be stored at room temperature, it is quite effective even under climatic adversities and ovatide is available in the market as 10 ml vial, which costs Rs. 300. It is cheaper than ovaprim. The selection of brooders and injecting methods are similar to pituitary extract.
Ind u ce d B reedin g kvickhet h Ovop e l
Ovopel, developed by the University of Godollo in Hungary, is a preparation containing mammalian GnRH and the water-soluble dopamine receptor antagonist, metoclopramide. The concentration of D-Ala6, Pro9NEt-mGnRH and metoclopramide are in the form of 18-20 micro gm/pellets and 8-10mg/pellets respectively. The hormone is thus available in pellet form. Each pellet contains superactive gonadoptropin releasing hypothalamic hormone analogue with an equal effect which a 3 mg normal acetone-dried dehydrated carp hypophysis gland has. Induced propagation of fish had been shown to be more effective if the hormone was administered in two doses, prime dose and resolving dose, as reported by Szabo, T., 1996. For cyprinids successful results were reported when 2-2.5 pellets/kg were administered to female brood fish. Dock, preliminary trial with single injection of Ovopel gave encouraging result on a few species of Indian major carps and Clarias batrachus.
The required amount of ovopel was calculated on the basis of weight and condition of brood fish. The pellets were pulverized in a mortar and dissolved in distilled water. The trails were conducted in July-August of 1999.
The new inducing agent. ovopel is easy to store, simple to use and less expensive, as reported by Szabo. T, 1996. However, in India, detailed studies to establish its efficacy and economic viability are required to be undertaken. The hormone has been successfully tested for ovulation in several species of cyprinids, the Common carp, the Silver carp and the tench (Horvath et al, 1997) in Europe. Ovulation was also reported in African Cat fish (Brzuska, E. 1998). I Indien, Ovopel was used with success in induced breeding of major carps in UP, Haryana and Punjab. In Assam the trials conducted recently on Labeo rohita (Rohu), Cirrihinus mrigala (Mrigal), Labeo gonius (Gonius) and Clarias batrachus (Magur) gave encouraging results. This indicates the possibility of using this new hormone preparation for commercial production of fish seeds if made available to farmers at a competitive price.
O t han r Su b sta n ce s oss e d f o r jag n duc e d B r ee d i g
Other substances like LH-RH analogues, steroids, and clomiphene are used for induced breeding of fishes.
LH-R H analo g ue :
Various analogues of Luteinizing hormone -releasing hormone (LH-RH) have been used for induced breeding of fishes. Investigations have revealed that the potential action of releasing hormone when dopamine antagonist is simultaneously used with the analogues is (10-100 µg/kg) used successfully in China. An analogue of teleost GNRH is found to be more potent than LH-RH. GNRH (Gonadotropin releasing hormone) stimulates GTH(Gonadotropin hormone) in teleosts (dosage 25-100 µg/kg).
S t e roids:
Selected steroid hormones are used to induce fish. The effects of steroid hormones on ovulation are seen primarily as germinal vesicle breakdown (GVBD). Ovulated oocytes require at least 4 hours to become fertilisable in mullets, whereas in most of the fishes oocytes are fertilisable immediately. The action of pituitary gonadotropins on oocyte maturation is known to be mediated through steroid hormones. Deoxycorticosterone acetate (DOCA) and cortisone effectively stimulate (dosage 50 mg/kg of fish) ovulation in Heteropneustes fossilis (Goswamy and Sunderraj, 1971). 17á-hydroxy-20B dihydroprogesterone (17á-20BDP) is useful to induce gold fish, trout and pikes (Jalabert, 1973). Other steroid hormones commonly used for spawning teleosts are cortisone acetate, deoxycortisol, deoxycorticosterone, hydroxycortisone, progesterone, 11 deoxycorticosterone and 20B progesteron. The advantages of steroids are:most compounds are available as pure preparations in synthetic forms, the quality of steroid preparations is uniform and steroid hormones are much cheaper than gonadotropin preparations.
Cl o miph e ne :
It is an analogue of the synthetic non-steroidal estrogen chlorotrianisene. It is known to have antiestrogenic effects in teleosts. It triggers the release of gonadotropins. The injections of clomiphene (10 µg/g) induced ovulation within 4 days in gold fish, whereas with same dosage, common carp spawned successfully after 40-64 hours.
E s t i m a t i o n o f E g g s :
The eggs are collected from the hapa by means of cup or tray or beaker and transferred to the buckets. The breeders are also removed from the hapa and their weights areoted. The difference in weights reveals approximately the number of eggs laid. The eggs are kept in a rectangular piece of close meshed mosquito net and allow the water to drain off. The eggs are measured in a beaker, mug or cup of known volume and transferred to hatcheries. Thus estimation of total quantity is made from total volume of the eggs measured. Percentage of fertilization can be arrived at by counting the number of fertilized eggs from egg samples of 1 ml measure.
B r ead i n g o f C o m mo n c ar sid :
Common carp (Cyprinus carpio) generally breeds in confined water. Spawning takes place in shallow marginal, weed infected areas from January to March and from July to August. Common Carp is also observed to breed round the year. Controlled breeding of common carp is conducted to achieve better spawning and hatching. A set of selected brooders one female and two males are put together in breeding hapa. In order to ensure successful spawning sometimes the female fish is injected with pituitary gland extract at a low dose 2 to 3 mg per kg. Body weight. Freshly washed aquatic weeds (Hydrilla, Najas, Eichhornia etc) are uniformly distributed inside the hapa. These aquatic weeds act as egg collections. The quantity of weed used is roughly double the weight of the female introduced. Each weed attached with 40, 000 to 1, 00, 000 eggs are distributed into a single hatching hapa. After 4 or 5 days the weeds are taken out carefully.
